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    上海研域?yàn)槟v述:樣品蛋白的提取和定量

    發(fā)布時(shí)間: 2018-12-21  點(diǎn)擊次數(shù): 1345次

    上海研域今天為您講述:樣品蛋白的提取和定量

    方法一:采取Tris-丙酮法進(jìn)行蛋白提取,

         方法如下:

        (1)取0.5ɡ鮮葉放入用液氮預(yù)冷的研缽中,加入適量液氮后迅速將其磨成粉末。

        (2)加入0.25ɡ水不溶性PVP,加入4倍鮮葉體積即2ml蛋白提取緩沖液 充分研磨。

        (3)4℃下45min,后離心(4℃,15000g,15min)

        (4)取上清液加入2.5倍即5ml -20℃預(yù)冷的丙酮,-20℃下靜置45min,之后同上離心,取沉淀在-20℃下靜置揮去丙酮。

        (5)加入1ml上樣液(12.5% ,0.5mol/L Tris-HCL PH6.8),沉淀充分溶解后,同上離心,取上清液即為待測蛋白溶液。

        方法二:

        取1~2g茶鮮葉加入等量PVPP和少量石英砂,液氮研磨,加入pH 7.4的PBS緩沖液繼續(xù)研磨直至勻漿,15000 g、4℃離心15 min,上清液即為粗酶液。

        粗酶液放于4℃冰箱中保存?zhèn)溆?。蛋白定量采用G-250法(Bradford法)進(jìn)行。

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